Western Blot 实验原理：蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot，也称Western、Western blotting、Western印迹，是用抗体检测蛋白的重要方法之一。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。

与 Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝 酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗 体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋 白水平的表达。

Western Blot 实验步骤：样品制备、上样与电泳、转膜、封闭、抗体孵育和检测

Western Blot 实验试剂：

   样品制备   

   蛋白定量   

应用: WB;Dot;ELISA 推荐稀释浓度: 1:500-1:5000
同种型：小鼠lgG 特异性：适用所有物种
Bradford 法是最简单和快速的比色蛋白定量方法，Bradford 方法进行了改良，最大限度的加大蛋白定量的线性范围，变异性小于普通考马斯亮蓝染色法，灵敏度范围为 100～1500 µg/mL。
BCA蛋白定量试剂盒,45分钟内可完成测定，蛋白质测定范围是20～2000 µg/mL。

注：用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度；由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由RIPA裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

   孵育盒    

   凝胶溶液   

   电泳及上样缓冲液    

   蛋白Marker   

   染色液    

   转膜缓冲液   

   转印膜   

   酶标二抗    

二抗建议稀释范围:
免疫组化/免疫化学：1:500 - 1:5,000
ELISA 和 WB(显色底物)：1:5,000 - 1:100,000
WB(ECL化学发光底物)：1:10,000 - 1:200,000
防腐剂：无添加 (叠氮化钠作为防腐剂的使用将大大抑制辣根过氧化物酶的酶活性)。

   封闭    

   内参及标签抗体    

应用: WB;Dot;ELISA 推荐稀释浓度: 1:500-1:5000
同种型：小鼠lgG 特异性：适用所有物种

   显色试剂    

拜尔迪超敏化学发光液是一种基于鲁米诺的超灵敏、极低背景的化学发光检测底物溶液。通过加入促进化学发光信号的复合增强剂，对蛋白印迹实验中辣根过氧化物酶的检测具有极高灵敏度，可以检测到≤0.05ng/ml 浓度的 HRP。

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